Pešić-Mikulec Dragana, naučni saradnik, NIVS – Beograd
Gavinić Ljubica
Kaluđerović Violeta, vet.spec., AD “GALENIKA”, Zemun
PRIMENE GALISEPTA U MLEKARSKOJ INDUSTRIJI U KONTEKSTU UVOĐENJA HACCP KONCEPTA

Sredstva za dezinfekciju sadrže hemijska jedinjenja koja uništavaju i patogene i apatogene bakterije. Mogućnost dejstva hlora i hlornih preparata ispitivali su mnogi autori ( 4) i ukazali na činjenicu da je slobodna hipohlorna kiselina aktivni germicidni agens hipohlorata. Uništavanje mikroorganizama odvija se oštećenjem ćelijske opne i penetracijom aktivnog germicidnog sredstva u protoplazmu mikroorganizma.Razorno dejstvo hipohlornih preparata na mikroorganizme pripisuje se direktnom delovanju hlora tjs. njegovim vezivanjem za vitalne delove ćelija za enzimski sistem i protoplazmu. U mlekarskoj industriji hlorni preparati nalaze primenu u dezinfekciji pribora za mužu, mlekovoda, raznih posuda,cisterni za prevoz mleka,mašina za preradu mleka,mašina za automatsku mužu krava i ostale opreme. Mogu se koristiti za čišćenje i dezinfekciju radnih površina zidova i podova u mlekara i postrojenjima za otkup mleka kaoi za čišćenje i dezinfekciju hladnjača i prevoznih sredstava. Praksa naših mlekara je da se najveći deo vode obezbeđuje iz sopstvenih bunara. Bunarska voda da bi bila dobrog kvaliteta mora da ispunjavazahteve kvaliteta vode za piće. Zbog toga je poželjno bunarsku vodu pripremiti a za tu pripremu su najzačajniji:hlor i kreč gde je hlor i danas najviše korišćen reganes.(11) Hlor kao dezinficijens može da se koristi u vidu jedinjenja hlora .
Hlor prevodi fero (Fe2+) i mangano (Mn 2+) soli u neratsvorene feri (Fe3+) i mangani (Mn 4+) jedinjenja (Fe(OH)3MnO2. Glavni kriterijum za ocenu hlorisanja je mikrobiološki pregled vode.Na efikasnost dezinfekcije utiču različiti fizički i hemijski faktori koji se mogu podeliti u tri osnovne grupe : osobine mikroorganizama, osobine dezinficijensa i faktori koji utiču na međuakcije dezinficijenasa i mikroorganizama .(5) Faktori koji utiču na dezinfekciju su rezistenstnost vegetativnih oblika bakterija,sposobnost formiranja spora i drugih rezistentnih vegetativnih oblika ,broja mikroorganizama i njihovo stanje. Efikasnost dezinfekcije zavisi od hemijske prirode dezinficijensa, koncentracija potrebnih za baktericidno optimalno bakteriostatično delovanje,rastvorvljivosti u vodi i uticaja na površinski napon. Osnovni parametri koji utiču na interakciju izmedju dezinficijenasa i mikroorganizama su temperatura,pH rastvora,prisustvo organskih materija i vreme. Preduslov za uspešnu dezinfekciju je kvalitetno pranje i održavanje higijene kako prostora i uređaja tako i ljudi koji rade u proizvodnji.

Sredstva za dezinfekciju koja se koriste u prehrambenoj industriji treba da imaju baktericidno dejstvo ,da ne deluju korozivno na uređaje i postrojenja da su postojana tokom upotrebe i da nemaju štetno dejstvo na ljudski organizam.Da bi dezinfekciono sredstvo bilo efikasno u prehrambenoj industriji potrebno je znati i osobine mikroorganizama koji se mogu naći u toj sredini.

MATERIJAL I METODE
Mleko je vrlo osetljiva životna namirnica koja u toku proizvodnog procesa može lako da se zagadi mikroorganizmima. Najčešća kontaminacija mleka i mlečnih proizvoda dolazi preko sudova ,mlekarskog pribora i opreme za preradu mleka.(7) “Galisept” ( natrijum dihlorizacijanurat dihidrat) je veoma pouzdano dezinfekciono sredstvo za široku primenu. Ispoljava snažno germicidno delovanje na bakterije , gljivice i dr.Upotrebljava se rastvoren u hladnoj vodi.U vodi se rastvara brzo i potpuno oslobađajući aktivni hlor u količini potrebnoj za germicidni učinak.(8) “Galisept” je u praksi ispitivan na sabirnom bazenu za mleko i u pogonu za proizvodnju maslaca. Preparat je korišćen prema preporuci proizvođača “GALENIKE AD”.Metodom uzimanja briseva sa površine od 100 cm2 prema literaturnim podacima (2,3) može da se prenese i do 97% prisutnih bakterija sa glatkih metalnih površina. Ispitivanja dezinfekcionog sredstva “Galisept” su izvedena u laboratorijskim uslovima na test mikroorganizmima koji se mogu naći u industriji mleka.Nakon obavljenih laboratorijskih ispitivanja rađena su ispitivanja u industrijskim uslovima.Za bakterije koje su poslužile kao test mikroorganizmi koristili smo selektivne podloge date u Pravilniku o metodama vršenja mikrobioloških analiza i superanaliza životnih namirnica ( Sl.list SFRJ br. 25/80). Plesni rodova Penicillium ,Cladosporium i Scopulariopsis izolovali smo na selektivnoj podlozi Czapek agaru. Rodove Aspergillus i Eurotium izolovali smo i kultivisali na 18% -tnom dihloran glicerol agaru (DG-18).Kvasce smo kultivisali na kvaščevom malat ekstrakt agaru (21 g kvaščev malat ekstrakt, 20,0 g agara u 1000 ml destilovane vode ). Kolonije kvasaca i plesni nakon inkubacije od 7 dana na 250 su presejane u peptonsku vodu (0,1% Bacto -pepton u destilovanoj vodi).Suspenzije kvasaca ili plesni u količini od 1 ml presejane su u 9,0 ml rastvora dezinficijensa. Nakon delovanja dezinfekcionog preparata u vremenu od 10 minuta na 200C presejano je 1,0 ml suspenzije u 9,0 ml peptonske vode i homogenizovano.Srednja vrednost broja formiranih kolonija CFU/ml određena je posle 7 dana .Nakon tretmana sa dezinfekcionim preparatom mikroorganizmi su inkubirani na odgovarajućim temperaturama. Detekcija plesni rađena je na osnovu rasta plesni zasnovanog merenjem promena metaboličkih aktivnosti uzrokovanih u substratu.Kvasce i plesni koje smo koristili u radu izolovali smo iz mleka i mlečnih proizvoda.Nakon tretmana sa dezinfekcionim sredstvom kvasci i plesni su inkubirani na 25 0 C,zatim je konstatovano prisustvo kvasaca i plesni promenama u podlozi.Podloga koju smo koristili za kultivisanje kvasaca i plesnibila je sledećeg sastava : kvaščev ekstrakt 7,5 g, glukoze 30,0 g, KH2PO4 10,0 g, agar 20,0 g i destilovane vode 1000 ml.Nakon autoklaviranja podloga je razlivena u količini od 0,75 ml. Mikroorganizmi kolonija plesni i kvasaca ispitivani su inkubiranjem u periodu od 7 dana. Rezultati ispitivanja prikazani su u Tabelama 1,2,3,4 i 5.

REZULTATI ISPITIVANJA
Rezultati ispitivanja pokazuju da “Galisept”ima dobar baktericidni efekat u svim ispitivanim koncentracijama (1,2,3,i 4%).Rezultati ispitivanja su pokazali da “Galisept” ima dobar baktericidni efekat u sve tri koncentracije prema Proteus vrstama i E.coli.U koncentraciji od 2 i 3 % ima dobar baktericidni efekat prema Staph.aureus i Str.faecalis.U koncentraciji od 3% ima dobro delovanje na spore Bacillus cereus-a a u koncentraciji od 3 i 4 % ima dobro delovanje na kulture plesni i kvasaca.Mikroorganizmi koje smo koristili u radu izolovani su u mleku mlečnim proizvodima. Test mikroorganizme koje smo korisrtili u ispitivanju efikasnosti dezinfekcionog preparata “Galisept” prikazani su u Tabeli 1.

Tabela 1. Mikroorganizmi koje smo koristili kao test organizme za proveru efikasnosti dezinfekcionog učinka preparata “Galisept”

Rezultati ispitivanja 1 i 2 % rastvora “Galisept”-a na test mikroorganizmima izolovanim iz mleka i mlečnih proizvoda prikazana je u Tabeli 2. Tabela 2.Ispitivanje osetljivosti test mikroorganizama na određeno vreme ekspozicije dezinfekcionom sredstvu.

Legenda:
- nema rasta
+ ima rasta

Plesni i kvasci koje smo koristili kao test mikroorganizme izolovali smo iz mleka i mlečnih proizvoda.Dominantne vrste plesni koje su dovodile do kvara mlečnih proizvoda pripadale su rodovima Penicillium spp.(7,6),zapadni autori su izolovali 371 koloniju plesni iz sira pri čemu je 91% pripadalo rodu Penicillium. Ostale vrste koje su takođe izolovane kao kontaminenti pripadale su rodovima Aspergillus, Eurotium,Cladosporium. Kvasci kontaminenti mleka i mlečnih proizvoda pripadali su vrstama Pichia anomala,T.delbrueckii,D.hansenii i Pichia norvegensis.Zapadni autori su našli da 0,37% hlornih preparata za 2 minuta ubija Aspergillus flavus,A.niger i P.chrysogenus.(2,3) Ovaj autor je takođe ispitivao da su askospore Eurotium repens rezistentne na 0,37% koncentraciju hlora dok koncentracije hlornog preparata od 3% deluje dobro na askospore Eurotium repens. Proizvodi iz kojih smo izolovali plesni i kvasce koje smo testirali prikazani su u Tabeli 3.

Tabela 3. Plesni i kvasci kojesmo koristili kao test organizme za proveru efikasnosti dezinfekcije preperatom “Galisept”.

U Tabeli 4 prikazana su ispitivanja delovanja “Galisepta-a” na kultute plesni i kvasaca u koncentraciji od 3 % za period od 7 dana nakon inkubiranja pri temperaturi od 25oC.

Tabela 4. Ispitivanje delovanja “Galisept-a” na kulture plesni i kvasaca pri koncentraciji dezinficijensa od 3%

Legenda: + rast kvasaca /plesni
- nema rasta kvasaca/plesni,

U Tabeli 5 prikazan je rezultat ispitivanja 3% rastvora “Galisept” preparata u duplikatoru za proizvodnju kiselo mlečnih napitaka I u silosima za mleko na farmi krava

Tabela 5. Rezultati ispitivanja 3% rastvora “Galisept” u duplikatoru za proizvodnju kiselo mlečnih napitaka i na silosima za mleko na farmi krava

Napomena:Rađeno je u 5 ponavljanja

ZAKLJUČAK
Mikroorganizme koje smo koristili za testiranje dezinfekcionog preparata “Galisept” izolovali smo iz mleka i mlečnih proizvoda. Rezistentnost mikroorganizama na dezinfekciono sredstvo zavisi od vrste i soja test mikroorganizma ali i aktivne komponente dezinficijensa. Različiti sojevi mikroorganizama mogu pokazati različitu osetljivost prema dezinfekcionom sredstvu. Testirani preparat je u uslovima ispitivanja u laboratoriji na izolovanim test mikroorganizmima pokazao dobre osobine a iz poslednje tabele vidi se dobar procenat redukcije mikroorganizama u mlekari i na farmi krava i kretao se od 90 do 98,12 %.

Pešić-Mikulec Dragana
Gavinić Ljubica
Kaluđerović Violeta